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賴氨酸(lysine,Lys)含量測(cè)定試劑盒-說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2025-01-10      瀏覽次數(shù):766

賴氨酸(lysine,Lys)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 /96

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

賴氨酸是人體必需氨基酸之一,能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能,并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低,且在加工過(guò)程中易被破壞而缺乏,故稱為第一限制性氨基酸。

測(cè)定原理:

蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個(gè)游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì),其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同,而且僅有個(gè)游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。

組成:

產(chǎn)品名稱

BH6010-100T/96S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:粉劑

1  

4℃

試劑二:液體

12.5ml

4℃

試劑三:液體

15ml

4℃

試劑四:60%乙醇(自備

1  

4℃

說(shuō)明書(shū)

1

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

賴氨酸提取:

樣本烘干粉碎,稱取約 0.01g 樣本,加入 1ml 提取液,充分勻漿。80℃水浴提取 20min,冷卻后 10000g

離心 10min,取上清待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm,蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制:取 10ml 試劑一與 10ml 試劑二混合搖勻,取上清備用。用不完的試劑 4℃保存。

3、在有蓋EP 管中加入下列試劑:

試劑名稱(μl

測(cè)定管

空白管

樣本

100


提取液


100

工作液

200

200

混勻,80℃水浴 30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至常溫。

試劑四

300

300

混勻,取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中,于 530nm 波長(zhǎng)處記錄吸光值AA=A 測(cè)定管-A 白管。空白管只要做一管。

賴氨酸含量計(jì)算:

a.  用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212;x 為賴氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計(jì)算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質(zhì)量計(jì)算

賴氨酸含量(µg/g 干重)=[(A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(A+0.0212) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1ml;V2:加入提取液體積,1 ml;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mlW:樣本質(zhì)量,g;1.1515,校正系數(shù)。

b.  96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0031x - 0.0212x 為賴氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計(jì)算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質(zhì)量計(jì)算

賴氨酸含量(µg/g 干重)= [(A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(A+0.0212) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mlV2:加入提取液體積,1 ml;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml; W:樣本質(zhì)量,g;1.1515,校正系數(shù)。


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