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BCA 法蛋白含量測定試劑盒

更新時(shí)間:2025-01-13      瀏覽次數(shù):911

BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書

分光光度    50 /48

正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。測定意義:

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理:

堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將 Cu2+還原成Cu+2 分子BCA Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 處吸收峰zui強(qiáng)。

自備儀器和用品:

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)、移液器、1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水

組成:

 

產(chǎn)品名稱

DE6003-50T/48S

Storage

試劑A:液體

60ml

4℃

試劑B:液體

1.2ml

4℃

標(biāo)準(zhǔn)蛋白:液體

2ml

4℃

說明書

一份

 

工作液配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×1 ml,將試劑A B 按照 501 的比例混合,蓋緊后充分混勻。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取:

1、液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。

2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水冰浴勻漿,8000g,4℃離心 10min,取上清,即待測液。

 

3 、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(ml500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min;然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

測定步驟:

1.     分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 562 nm,蒸餾水調(diào)零。

 

2. 工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min。


空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

蒸餾水μl

20



標(biāo)準(zhǔn)品μl


20


待測液μl



20

工作液μl

1000

1000

1000

混勻后置于 60℃保溫 30min,于 1ml 比色皿在 562nm 處測定吸光值A,分別記為A

空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。計(jì)算公式:

Cpr (mg/ml) = C 標(biāo)準(zhǔn)品×A 測定管-A 空白管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管

= 0.5×A 測定管-A 空白管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管

Cpr (mg/g)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×A 測定管-A 空白管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ W

= 0.5×A 測定管-A 空白管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ W W: 樣本質(zhì)量,g

注意事項(xiàng):

BCA 法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品。測定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),若A 測定管-A 空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定,以確保測定的準(zhǔn)確性。

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